Sayfa 52 / 76
Sağlıklı bir çocuğun idrarında önemsiz miktarda protein bulunur ve sıradan kalite testleriyle saptanmaz. İdrardaki protein miktarı (proteinüri), böbrek hastalığı, toksikoz, lösemi, pernisiyöz anemi, böbreklerde tıkanıklık, böbreklerin palpasyonundan sonra (palpasyon albüminüri) ve fiziksel aşırı çalışma, duygusal aşırı yüklenme, ateş, hipotermi ve diğer koşullar ile artar.
İdrarda proteinin kalitatif tayini. İdrarda proteinin kalitatif tayini için, sülfosalisilik asit ile test, nitrik asit ile Heller testi, kaynama testi vb. en yaygın şekilde kullanılır.Protein çökelmesine dayalı numuneler kullanılırken, hatalardan kaçınmak için bazı genel kurallara uyulması önemlidir.
- İdrar asidik olmalıdır. Test idrarı alkali ise asetik asit eklenerek hafifçe asitlendirilir. Ancak albüminin çözünmesine neden olmamak için asit miktarı fazla olmamalıdır.
- İdrar temiz olmalıdır. Bulanıklık varsa, protein çökmesine neden olmadan giderilmelidir.
- Numune iki test tüpünde yapılmalıdır - deney ve kontrol. Kontrol olmadığında, deneysel bir test tüpünde hafif bir idrar bulanıklığı fark etmeyebilirsiniz.
Sülfosalisilik asit testi, idrarda protein varlığına en duyarlı testlerden biridir. Bir test tüpüne 3-5 ml idrar dökülür ve 1 ml idrara 2 damla oranında %20'lik sülfosalisilik asit çözeltisi eklenir.
Başka bir modifikasyonda, numunenin sabitlenmesi için bir test tüpüne 1 ml idrar dökülür ve buna 3 ml %1'lik sülfosalisilik asit çözeltisi eklenir.
Birinci ve ikinci durumda, idrarda protein varlığında, sülfosalisilik asit ilavesinden sonra bulanıklık ortaya çıkar. Sonuç, bulanıklığın yoğunluğu ile dikkate alınır: zayıf bir pozitif reaksiyon (opalesans), (kısa +), pozitif (+), keskin pozitif ile gösterilir.
Heller testi şu şekilde gerçekleştirilir: birkaç mililitre idrar dikkatlice (karıştırılmadan) 1.20 nispi yoğunluğa sahip 1-2 ml %30'luk bir nitrik asit çözeltisi üzerine tabakalanır. İdrarda 0,033 g/l veya daha fazla protein varsa her iki sıvının sınırında beyaz halka oluşur ve test pozitif olarak değerlendirilir. İdrarda büyük miktarda ürat ile beyaz bir halka da oluşabilir, ancak sıvılar arasındaki sınırın hemen üzerinde bulunur. Hafif ısıtma ile ürat halkası kaybolur.
Kaynama testi güvenilir sonuçlar verir, ancak yalnızca idrarın pH'ı 5,6 ise. Bu test en iyi şekilde, 1 litre suda çözülmüş 56.5 ml buzlu asetik asit, 118 g kristalli sodyum asetat içeren Bange'nin asetat tamponu ile Ruppert'in modifikasyonunda gerçekleştirilir. 1-2 ml Bange tamponuna 5 ml idrar ekleyin ve 1/2 dakika kaynatın. İdrarda protein varlığında bulanıklık oluşur.
İdrarda proteinin kantitatif tayini. İdrarda proteinin kantitatif tayini için en sık Esbach yöntemi, Brandberg-Roberts-Stolnikov yöntemi, Sols biuret yöntemi vb.
Brandberg - Roberts - Stolnikov yöntemi, kalitatif bir Geller testine dayanmaktadır ve idrarda 0,033 g / l ve üzeri protein varlığını belirlemenizi sağlar. Bir dizi test tüpü hazırlanıyor. Protein içeren idrar, sıvıların sınırında (Roberts-Stolnikov reaktifi ve idrar) beyaz bir halkanın oluşması durana kadar salin veya su ile seyreltilir. 0,033 g/L protein içeriğinde ikinci ve üçüncü dakikalar arasında iki sıvının sınırında bir halka belirir. Halka birkaç dakikadan daha erken ortaya çıkarsa, idrar su ile seyreltilir. Halkanın oluştuğu idrarın en yüksek dilüsyonu 0,033 g/l protein içerir. Son tüpteki idrarın seyrelme derecesi 0,033 g/l ile çarpılır ve tam idrardaki protein konsantrasyonu elde edilir.
proteinüri. Böbrek hastalığında, böbrek filtresinin geçirgenliğinin artmasından kaynaklanır. Protein idrara başka bir şekilde (idrar yolu, vajina, prostat vb. Mukoza zarlarından) girebilir - böbrek dışı proteinüri. Renal proteinüri organik ve fonksiyonel olarak ayrılır. Organik proteinüri, fonksiyonel - vazomotor bozukluklarla böbrek parankimi hasarı ile ilişkilidir. Fonksiyonel proteinüri tiplerinden biri ortostatik (lordotik, aralıklı, postural, siklik) albüminüridir. Belirgin bir lordoz ile, karaciğer tarafından inferior vena kavanın omurgaya bastırıldığı bir pozisyon yaratıldığı ve bunun böbrek damarlarında durgunluğa ve konjestif albüminüriye yol açtığı varsayılmaktadır. Elektron mikroskobik çalışmalar, ortostatik albüminürinin renal glomerüllerde inflamatuar bir sürecin morfolojik belirtilerine sahip olduğunu ortaya koymuştur.
Uzun süreli gözlemlerimiz, ortostatik albüminürinin sıklıkla böbrek anomalilerinden veya anormal yerleşimlerinden kaynaklandığını göstermektedir.Bu bağlamda, tarama testi olarak ortostatik testin kullanılmasını öneriyoruz. Bu testle ortostatik albüminüriyi belirledikten sonra, üriner sistemin gelişimindeki anormallikleri ekarte etmek için genellikle boşaltım ürografisi yaparız.
ortostatik test. Testin arifesinde, akşam, yatmadan yaklaşık bir saat önce, çocuk mesaneyi boşaltmalıdır. Sabah yataktan kalkar kalkmaz hemen idrarını yapar ve bu idrar ayrı bir kapta toplanarak yükten önce porsiyon olarak işaretlenir. Daha sonra çocuğa yarı yumuşak bir sandalyede diz çökmesi, arkasında bir sopayla dirsekleriyle tutması teklif edilir. Çocuk bu pozisyonda 15-20 dakika olmalı, bundan sonra mesaneyi boşaltır ve egzersizden sonra toplanan idrar porsiyon olarak not edilir. Protein, egzersizden önce ve sonra elde edilen idrar kısımlarında incelenir. İkinci porsiyonda (egzersiz sonrası elde edilen) protein içeriğinin birinci porsiyona göre 2-3 kat veya daha fazla saptanması veya artması ortostatik test pozitif olarak değerlendirilir.
İdrarda protein fraksiyonlarının belirlenmesi.Çizilmiş elemanlar gerçekleştirilir. Glomerülonefrit, tüberküloz, polikistik böbrek hastalığı, böbrek tümörleri, hemorajik vaskülit, kollajenoz, mesane iltihabı ve diğer hastalıklarda idrarda önemli miktarda kırmızı kan hücresi bulunabilir. Makro ve mikrohematüri vardır. Brüt hematüri ile, idrar renginin değiştiği zaten makroskopik olarak not edilebilir. İdrarda çok sayıda kırmızı kan hücresi bulunması nedeniyle kırmızı veya "et sloplarının rengi" olur. Mikrohematüri ile eritrositler yalnızca tortunun mikroskopisi ile tespit edilir.
Glomerülonefrit sırasında eritrositlerin idrara nüfuz etmesi, zehirlenme, glomerüler kılcal damarların geçirgenliğinin artması ve bunların yırtılmasından kaynaklanır. İdrar yollarının iltihaplı hastalıklarında, pelvis taşları, üreterler, mesane, eritrositler, hasarlı mukoza zarlarından idrara girer. Bir idrara çıkma sırasında idrarı porsiyonlar halinde (iki ve üç bardak numuneler) toplarken, üriner sistem hematürinin hangi segmentinden geldiğini bulmak yüksek olasılıkla mümkündür. Bu nedenle, üretradan gelen hematüri ile idrarın ilk kısmında kan pıhtıları olabilir. Hematüri akut mukozal inflamasyon, taş veya başka bir mesane hastalığından kaynaklanıyorsa, son idrar akışında daha fazla kan dökülecektir. Üreter hasarıyla ilişkili hematüride, bazen şekil olarak üreterin lümenine karşılık gelen fibrin kalıpları bulunur. Diffüz böbrek hastalığında hematüri, atılan idrarı eşit şekilde boyar.
lökositler. Sağlıklı bir çocuğun idrarında görüş alanında bekar olabilirler. Her görüş alanında 5-7 lökositin saptanması, idrar yollarında bir enflamatuar süreci gösterir. Bununla birlikte, erkeklerde fimosis, balanit ve balanopostit ve kızlarda vulvovajinit ile ortaya çıkan lökositlerin dış genital organlardan idrara girmesi her zaman dışlanmalıdır. İki ve üç cam numuneler lökositi için yaygın olarak kullanılmaktadır.
silindirler. İdrarda hiyalin, granüler, epitelyal ve mumsu silendirler şeklinde olabilirler. Hepsi böbreklerde patolojik durumlarda oluşabilir. Sağlıklı çocukların idrarındaki silindirler nadirdir. Genellikle idrar tortusunu incelemenin kantitatif yöntemlerinde bulunurlar. Kural olarak, bunlar, tübüllerin lümeninde pıhtılaşan protein olan hiyalin silindirlerdir. Epitel silendirleri böbrek parankimindeki hasarın göstergesidir ve renal tübüllerin yapışık epitel hücrelerinden oluşur. Daha belirgin bir distrofik süreç ile böbreklerde granüler ve mumsu silindirler belirir. Bunlar, yağlı dejenerasyona uğrayan tübüler epitelin yırtık hücrelerinin kalıplarıdır. Ayrıca idrar tortusunda, şekillendirilmiş elementlerden, hemoglobinden, kan methemoglobininden oluşan silindirler bulabilirsiniz. Bu tür silindirlerin temeli genellikle diğer elementlerin üzerine bindirildiği proteindir.
Silindiroidler, amonyum ürat tuzları, mukus, lökositler, bakterilerden oluşan hiyalin silindirlere benzer oluşumlardır. Silindiroidler, akut glomerülonefritte iyileşme fazında bulunur. Yapılarının heterojenliği bakımından hiyalin silindirlerden farklıdırlar.
inorganik tortu.Çocuklarda inorganik tortuda üratlar, oksalatlar, fosfatlar ve ürik asit kristalleri daha yaygındır. Bunların idrarla aşırı atılımı idrar yollarında taş oluşumuna yol açabilir.
Uratüri - idrarda ürik asit tuzlarının artan atılımı. Yenidoğanlarda yaşamın ilk günlerinde görülür. Önemli miktarda ürat nedeniyle, yenidoğanların idrarı kiremit kırmızısı bir renge sahip olabilir. Yeni doğanlarda hücresel elementlerin büyük bir parçalanması, sıklıkla, artan diürez ile ürat tuzları uzaklaştırıldığı için, yaşamın ilk haftasının sonunda kaybolan bir ürik asit enfarktüsünün oluşumuna yol açar. Daha büyük çocuklarda uratüri, çok miktarda et yemek, kas yorgunluğu, ateşli durumlar ile ilişkilendirilebilir. Hiperuratüri, özellikle Lesch-Nyhan sendromunda belirgin olan kalıtsal hiperürisemiye bağlı olabilir.
Oksalaturi - idrarda kalsiyum oksalat atılımının artması, oksalik asit açısından zengin gıdaları yemekle ilişkilendirilebilir. Bu tür ürünler kuzukulağı, ıspanak, domates, yeşil bezelye, fasulye, turp, çay, kahve vb. Oxalaturia, genellikle nefrolitiazis ve kronik piyelonefrit ile komplike olan kalıtsal bir hastalık olarak da bilinir. Şiddetli oksalatüri ile günlük idrardaki oksalat içeriği, izin verilen değerin 3-4 katı veya daha fazladır (norm,% 8-10 mg'dır).
Fosfatüri - alkali idrarda çökelen fosfat tuzlarının idrarla atılımının artması. Bitki ürünlerini (sebzeler, meyveler vb.) Yerken ve ayrıca idrar yolu mukozasındaki iltihaplanma sürecinde, bakteriyel fermantasyon ve idrarın alkalileşmesi meydana geldiğinde gözlenir. Fosfatüri mesane taşı oluşumuna neden olabilir.
R-you %50 nitrojen çözeltisi veya p-lariyonik. Belirleme süreci: bir dizi test tüpü bir tripoda yerleştirilir ve 1 ml nitrik asit çözeltisi dökülür, 1 ml idrar eklenir, reaktifin üzerine tabakalanır ve zamanı not edilir, bir halka göründüğünde, halkanın ortaya çıkma zamanını kaydederiz. Halka genişse, idrarı seyreltin.
4. %3 sülfosalisilik asit ile idrarda protein konsantrasyonunun belirlenmesi.
Solüsyonlar: %3 sc, sodyum klorür %9, pp albümin %10 Belirlemenin ilerlemesi: 1.25 ml temiz idrar, ölçülen iki santrifüj tüpüne "O" - deneyim ve "K" - kontrol konur. Deneysel olana 3,75 ml %3'lük bir sülfosalisilik asit çözeltisi ve kontrole 3,75 ml %0,9'luk bir sodyum klorür çözeltisi eklenir. 5 dakika bekletin ve ardından 5 mm tabaka kalınlığına sahip bir küvette 590 - 650 nm dalga boyunda (turuncu veya kırmızı ışık filtresi) FEC üzerinde fotometri kontrole karşı deney yapın. Hesaplama, kalibrasyon grafiğine veya tablosuna göre yapılır. Yöntem ilkesi sülfosalisilik asit içeren proteinin, yoğunluğu proteinin konsantrasyonu ile doğru orantılı olan bulanıklık vermesine dayanır.
5. İdrarda glikoz tespiti, Gaines-Akimov testi. Prensip: Glikoz, alkali bir ortamda ısıtıldığında bakır dihidroksiti (sarı) bakır monohidroksite (turuncu-kırmızı) indirger. reaktif hazırlama: 1) 13.3 gr kimya. saf kristal bakır sülfat (CuSO 4 . 5 H 2 O) çözeltisi. 400 ml su içinde. 2) 50 gr kostik soda 400 ml suda eritilir. 3) 15 gr saf gliserin 200 ml su ile seyreltilir. Birinci ve ikinci çözümleri karıştırın ve hemen üçüncüyü ekleyin. Reaktif rafları. tanım ilerleme: Test tüpüne 1 damla idrar ve 9 damla reaktif eklenir ve su banyosunda 1-2 dakika kaynatılır. Pozitif test: sıvı veya çökeltinin sarı veya turuncu rengi.
6. Glikoz oksidaz yöntemiyle idrarda glikozun kalitatif tayini. Yöntem ilkesi: reaksiyona göre glikoz oksidaz varlığında glikoz oksitlenir: Glikonant + H202 ile Glikoz + O2. Peroksidazın etkisi altında oluşan peroksit H, substratı renkli bir ürün oluşumu ile oksitler.
İçine dökün ve 37 0 C'de 15 dakika inkübe edin. CPK, 5 mm küvete bakın.
Daha sonra şu formüle göre hesaplamalar yapılır: С op = Ext op . Cst/ Ect st.
7. Lestrade testi ile idrarda keton cisimlerinin saptanması. Cam slayt üzerine (neşterin ucunda) bir toz veya bir Lestrade solüsyonu tableti uygulanır ve üzerine 2-3 damla idrar uygulanır. Keton cisimciklerinin varlığında pembeden mora bir renk ortaya çıkar. Numune beyaz zemin üzerinde değerlendirilir.
8. %5 alkol amidopirin solüsyonu ile yapılan bir testle idrarda kan pigmentinin saptanması.
%1,5 amidopirin alkol solüsyonu (0,5 g amidopirin 10 ml %96 alkolde eritilir) %2,3 hidrojen peroksit solüsyonu 1,5 g hidropirit 50 ml suda eritilir) Prosedür: 2-3 ml asetik eter ekstraktı veya çalkalanmış süzülmemiş idrarı bir test tüpüne dökün, 8-10 damla %5'lik amidoprin çözeltisi ve 8-10 damla %3'lük hidrojen ekleyin oksit solüsyonu, en geç 2-3 dakika içinde sonucu dikkate alın.Örnek gri-mor renk varsa pozitif kabul edilir.
Neubauer testi ile idrarda ürobilin tespiti.
Ürobilinojenin 2 g paradimetilaminobenaldehit ve 100 ml hidroklorik asit çözeltisinden (200 g.l) oluşan Erlich reaktifi ile renk reaksiyonuna dayanır.Robilinojen.Normalde renk daha sonra ortaya çıkar veya tamamen yoktur.İdrar durduğunda, ürobilinojen ürobilinojene dönüşür ve numune yanlış negatif olabilir.
Rosin testi ile idrarda bilirubin tespiti.
Alkol iyot çözeltisi (10 g.l): 1 g kristal iyot, 20-30 ml 96 g rektifiye alkol içinde 100 ml kapasiteli bir silindirde eritilir ve daha sonra işarete kadar alkolle doldurulur. Belirleme süreci, iyotun alkol çözeltisi üzerindedir.) Sıvılar arasındaki sınırda bilirubin varlığında, yeşil bir halka gözlenir (antipirin alırken ve ayrıca idrardaki kan pigmentini emerken, test pozitif çıkıyor) Sağlıklı bir insanda bu test negatiftir.
Kuru kimya (tekel testleri) ile idrar incelemesi.
Prensip. Yöntem, proteinin tampon çözeltideki göstergenin rengi üzerinde uyguladığı etkiye dayanır ve bunun sonucunda boya rengi sarıdan maviye değişir.
İdrarda protein varlığını test ederken ve gösterge kağıdı kullanarak pH'ı belirlerken, aşağıdaki yönergelerin izlenmesi önerilir:
- İdrarı iyice yıkanmış bir tabakta toplayın.
- Taze toplanmış, koruyucu içermeyen idrar kullanın.
- Gerekli sayıda gösterge şeridini kutudan çıkardıktan sonra kutuyu dikkatlice kapatın.
- Gösterge bölgelerini parmaklarınızla tutmayın.
- Yalnızca etikette belirtilen son kullanma tarihi içinde kullanın.
- Gösterge kağıdını saklama kurallarına uyun.
- Sonuçları, talimatlarda bulunan talimatlara göre değerlendirin.
Kuru idrar kimyası analiz cihazında idrar testi yapmak.
Tanım ilerleme. Kutudan bir gösterge kağıdı şeridi çıkarılır ve her iki gösterge bölgesinin aynı anda nemlendirilmesi için test idrarına daldırılır. 2-3 saniye sonra şerit beyaz bir cam plaka üzerine yerleştirilir. Kalem kutusunun üzerinde yazılı olan renk skalasını kullanarak hemen bir pH değerlendirmesi yapın. Renk ölçeğindeki pH değeri 6.0'a (veya daha azına) karşılık gelir; 7.0; 8.0; 9.0.
İdrar hazırlama, idrar tortusundan mikroskobik inceleme ile yaklaşık olarak müstahzarların hazırlanması.
İdrar tortusunun mikroskobik incelemesi, lökositüri ve hematüri derecesinin daha doğru bir şekilde değerlendirilmesi için şekilli elemanların genel analizi ve kantitatif hesaplanmasında yaklaşık bir yöntemle gerçekleştirilir.
Mikroskopi için idrar sedimentinin hazırlanması için kurallar.
İdrarın sabah ilk kısmı mikroskobik incelemeye tabi tutulur.
Ön karıştırma işleminden sonra 10 ml idrar alınır, 1500 devirde 10 dakika santrifüj edilir.
Daha sonra idrarlı santrifüj tüpü keskin bir hareketle ters çevrilir, süpernatan hızla boş bir kavanoza dökülür.
Karıştırın, bir cam slayt üzerine bir damla koyun ve dikkatli bir şekilde bir lamel ile örtün.
Çökelti birkaç katmandan oluşuyorsa, karışımı hazırlayın ve ardından tekrar santrifüjleyin ve her katmandan ayrı ayrı karışımlar hazırlayın.
Gözle görülebilen bir tortunun yokluğunda, cam bir lam üzerine ve mikroskobik olarak bir damla idrar damlatılır.
Başlangıçta düşük büyütmede malzeme incelenir (göz merceği 7-10, objektif 8), kondansatör indirilirken diyafram hafifçe daraltılır, ardından yüksek büyütmede (göz merceği 10.7; objektif 40) preparasyon ayrıntılı olarak incelenir.
14.Nechiporenko'ya göre idrar tortusunun kantitatif çalışması.
Yöntem, gizli halsiz enflamatuar süreçler (piyelonefrit, glomerülonefrit), gizli piyüri için kullanılır. Patolojik süreci dinamik olarak incelemek. Tedavinin etkinliğini değerlendirmek için. Yöntemin avantajları: teknik olarak basit, fazla miktarda idrar gerektirmez ve uzun ömürlüdür. saklanması, poliklinik pratiğinde kullanılır. Zorunlu koşullar: sabah idrarı, orta kısım, asidik solüsyon (alkalide hücresel elementlerin kısmi yıkımı olabilir). 1. İdrar karıştırılır 2. 10 ml idrar bir ölçü santrifüj tüpüne konur ve 1500 rpm'de 10 dakika santrifüj edilir. 3. Santrifüjden sonra. emme Sıvının üstünü pipetleyin, bırakın. tam olarak 1 ml tortu. 4. Çökelti iyice karıştırılır ve Goryaev odası doldurulur. 5. Doldurduktan 3-5 dakika sonra şekillendirilmiş elemanları saymaya başlarlar. 6. Lökosit sayımı, Er, mercekli silindirler 15 hedef 8 indirildiğinde. kondansatör, 100 büyük hazne karesinde. Beyaz kan hücreleri, Er ayrı ayrı sayılır, silindirler (en az 4 Goryaev odası sayılır) atılır. arit. X \u003d A x 0,25x 10 6 / l. Norm: göl. 2-4x 10 6 /l, Er 1 x 10 6 /l'ye kadar, silindirler 0,02 x 10 6 /l'ye kadar (4 bölme için bir tane). Çocuklarda: lösemi. 2-4x 10 6 /l'ye kadar, Er 0,75 x 10 6 /l'ye kadar, silindirler 0,02 x 10 6 /l'ye kadar.
15. Zimnitsky'ye göre idrar tahlili
Bu test böbreklerin konsantre olma yeteneğini belirler. ve seyreltik idrar. Numunenin özü gün boyunca porsiyonlar halinde üç saatlik idrarın bağıl yoğunluğunun ve miktarının dinamik olarak belirlenmesinde. Test yapmak: sabah saat 6'da mesaneyi tuvalete boşalttıktan sonra, hasta gün boyunca her üç saatte bir ayrı kavanozlarda idrar toplar. Sadece 8 porsiyon. Araştırma ilerlemesi: 1. Teslimat. İdrar saate göre düzenlenir ve her porsiyonda miktar ve bağıl yoğunluk belirlenir. 2. Günlük idrar miktarını ve içilen sıvı miktarını belirlemek için karşılaştırın. atılımının %'si. 3. Gündüz ve gece diürezini hesaplayın, özetleyin, günlük diürezi alın. 4. Miktar ve bağıl dalgalanma aralığını ayarlayın. günlük idrar yoğunluğu, yani en küçük kısım ile en büyük kısım arasındaki fark nedir? Göstermek. sağlık testleri insanlar: 1. Günlük diürez 800-1500 ml. 2. Gündüz diürezi, gece boyunca önemli ölçüde baskındır. 3. Bireysel porsiyonlardaki idrar hacmindeki dalgalanmalar önemlidir (50 ila 400 ml). 4. 1.003'ten 1.028'e p dalgalanmaları, 0.008'den fazla olmalıdır. işlevli. böbrek yetmezliği: hipostenüri, hipoizostenüri, izostenüri, hiperstenüri, oligüri, anüri, noktüri.
16. Dışkıların genel özelliklerinin tanımı.
Normalde dışkı, sindirim sisteminin salgı ve atılım ürünlerinden, sindirilmemiş veya kısmen sindirilmiş gıda kalıntılarından ve mikrobiyal floradan oluşur. Dışkı miktarı 100-150 gr Kıvam yoğundur. Şekil silindiriktir. Koku dışkı normaldir. Kahverengi renk. R-tion nötr, hafif alkali veya hafif asidiktir (pH 6.5-7.0-7.5). Mukus yoktur. Kan yoktur. Sindirilmemiş yiyecek kalıntıları yoktur.
Böbrek ve idrar yolu hastalıklarının en önemli ve değişmez belirtilerinden biridir. İdrardaki protein konsantrasyonunun belirlenmesi, idrar çalışmasının zorunlu ve önemli bir unsurudur. Proteinürinin saptanması ve miktarının belirlenmesi, yalnızca birçok birincil ve ikincil böbrek hastalığının tanısında değil, aynı zamanda proteinürinin ciddiyetindeki değişikliklerin dinamik olarak değerlendirilmesi, patolojik sürecin seyri ve tedavinin etkinliği hakkında bilgi taşır. Eser miktarda bile olsa idrarda protein saptanması, olası böbrek veya idrar yolu hastalığı için uyarı vermeli ve yeniden analiz gerektirmelidir. İdrar çalışmasının anlamsızlığı ve özellikle idrar proteininin toplanması için tüm kurallara uyulmadan belirlenmesi özellikle dikkat çekicidir.
İdrarda protein belirlemeye yönelik tüm yöntemler şu şekilde ayrılabilir:
- kalite,
- yarı kantitatif,
- Nicel.
Kalitatif Yöntemler
Tüm idrarda protein için kalitatif testler proteinlerin çeşitli fiziksel ve kimyasal faktörlerin etkisi altında denatürasyon yeteneğine dayanmaktadır. Test idrar numunesinde protein varlığında, bulanıklık veya topaklanma görülür.
Pıhtılaşma reaksiyonuna dayalı olarak idrarda protein belirleme koşulları:
- İdrar asidik olmalıdır. Alkali idrar birkaç damla (2-3) asetik asit (%5-10) ile asitleştirilir.
- İdrar temiz olmalıdır. Bulanıklık bir kağıt filtre ile giderilir. Bulanıklık devam ederse, talk veya yanık magnezya (100 ml idrar için yaklaşık 1 çay kaşığı) ekleyin, çalkalayın ve süzün.
- Kalitatif bir numune, biri kontrol olan iki test tüpünde yapılmalıdır.
- Bulanıklık arayın, iletilen ışıkta siyah bir arka plan üzerinde olmalıdır.
İdrarda protein tayini için kalitatif yöntemler şunları içerir:
- kaynama testi ve diğerleri.
Çok sayıda çalışma, idrarda proteinin kalitatif tayini için bilinen çok sayıdaki yöntemin hiçbirinin güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlamadığını göstermiştir. Buna rağmen, Rusya'daki çoğu DLT'de, bu yöntemler tarama olarak yaygın olarak kullanılmaktadır - pozitif bir kalitatif reaksiyona sahip idrarda, proteinin daha fazla kantitatif tayini gerçekleştirilir. Kalitatif reaksiyonlardan Heller testi ve sülfosalisilik asit testi daha yaygın olarak kullanılır, ancak sülfosalisilik asit testinin genellikle patolojik proteinüriyi saptamak için en uygun olduğu kabul edilir. Kaynama testi, karmaşıklığı ve süresi nedeniyle şu anda pratik olarak kullanılmamaktadır.
Yarı kantitatif yöntemler
İLE yarı kantitatif yöntemler ilgili olmak:
- teşhis test şeritleri kullanılarak idrarda protein tayini.
Brandberg-Roberts-Stolnikov yöntemi, Geller halka testine dayanmaktadır, bu nedenle, bu yöntemle, Geller testinde olduğu gibi aynı hatalar gözlenir.
Şu anda, teşhis şeritleri idrardaki proteini belirlemek için giderek daha fazla kullanılmaktadır. Sitrat tamponundaki bromofenol mavisi boya, çoğunlukla bir strip üzerinde idrardaki proteinin yarı kantitatif tayini için bir gösterge olarak kullanılır. İdrardaki protein içeriği, reaksiyon bölgesinin idrarla temasından sonra gelişen mavi-yeşil rengin yoğunluğu ile değerlendirilir. Sonuç görsel olarak veya idrar analizörleri kullanılarak değerlendirilir. Kuru kimya yöntemlerinin büyük popülaritesine ve bariz avantajlarına (basitlik, analiz hızı) rağmen, genel olarak bu idrar tahlili yöntemleri ve özel olarak protein tayini ciddi eksiklikler içerir. Teşhis bilgilerinin bozulmasına yol açan bunlardan biri, bromofenol mavisi göstergesinin diğer proteinlere kıyasla albümine karşı daha fazla duyarlılığıdır. Bu bağlamda, test şeritleri esas olarak, idrar proteininin neredeyse tamamı albümin tarafından temsil edildiğinde, seçici glomerüler proteinürinin saptanmasına uyarlanmıştır. Değişikliklerin ilerlemesi ve seçici glomerüler proteinürinin seçici olmayana geçişi (idrarda globulinlerin görünümü) ile, protein belirleme sonuçları gerçek değerlerle karşılaştırıldığında olduğundan daha düşük tahmin edilmektedir. Bu gerçek, dinamik olarak böbreklerin durumunu (glomerüler filtre) değerlendirmek için idrarda protein belirlemek için bu yöntemin kullanılmasını imkansız kılar. Tübüler proteinüride, protein belirleme sonuçları da hafife alınır. Test şeritleri ile protein testi, düşük proteinüri düzeylerinin güvenilir bir göstergesi değildir (şu anda mevcut olan çoğu test şeridi, idrarda 0,15 g/L'den düşük konsantrasyonlarda protein saptayamaz). Striplerde protein tayininin negatif sonuçları, idrarda globulinler, hemoglobin, üromükoid, Bence-Jones proteini ve diğer paraproteinlerin varlığını dışlamaz.
Yüksek glikoprotein içeriğine sahip mukus pulları (örneğin, idrar yollarındaki iltihaplanma süreçlerinde, piyüri, bakteriüri), şeridin gösterge bölgesine yerleşebilir ve yanlış pozitif sonuçlara yol açabilir. Yanlış pozitif sonuçlar ayrıca yüksek üre konsantrasyonları ile ilişkilendirilebilir. Yetersiz aydınlatma ve zayıf renk algısı hatalı sonuçlara neden olabilir.
Bu bağlamda, teşhis şeritlerinin kullanımı tarama prosedürleriyle sınırlandırılmalı ve bunların yardımıyla elde edilen sonuçlar sadece gösterge olarak değerlendirilmelidir.
Nicel yöntemler
Doğru idrarda proteinin kantitatif tayini bazı durumlarda zor bir görev olduğu ortaya çıkıyor. Çözümünün zorlukları aşağıdaki faktörler tarafından belirlenir:
- sağlıklı bir kişinin idrarındaki düşük protein içeriği, genellikle bilinen çoğu yöntemin duyarlılık eşiğinde;
- kimyasal reaksiyonların seyrini engelleyebilecek birçok bileşiğin idrarındaki varlığı;
- çeşitli hastalıklarda idrar proteinlerinin içeriğinde ve bileşiminde önemli dalgalanmalar, bu da yeterli bir kalibrasyon malzemesi seçmeyi zorlaştırır.
Klinik laboratuvarlarda, idrarda protein tayini için "rutin" denilen yöntemler ağırlıklı olarak kullanılmaktadır, ancak bunlar her zaman tatmin edici sonuçlar vermemektedir.
Laboratuvarda çalışan bir analistin bakış açısından, idrardaki proteini ölçmek için tasarlanmış bir yöntem aşağıdaki gereksinimleri karşılamalıdır:
- kimyasal reaksiyon sırasında oluşan kompleksin absorpsiyonu ile geniş bir konsantrasyon aralığında numunedeki protein içeriği arasında doğrusal bir ilişkiye sahip olmak, bu da numuneyi araştırma için hazırlarken ek işlemlerden kaçınacaktır;
- basit olmalı, icracıda yüksek vasıf gerektirmemeli, az sayıda işlemle gerçekleştirilmelidir;
- küçük hacimlerde test malzemesi kullanırken yüksek hassasiyete, analitik güvenilirliğe sahip;
- çeşitli faktörlere karşı dirençli olmak (numunenin bileşimindeki dalgalanmalar, ilaçların varlığı, vb.);
- kabul edilebilir bir maliyeti var;
- otomatik analizörlere kolayca uyarlanabilir;
- belirlemenin sonucu, incelenmekte olan idrar örneğinin protein bileşimine bağlı olmamalıdır.
İdrarda proteinin kantitatif tayini için şu anda bilinen yöntemlerin hiçbiri "altın standart" olduğunu tam olarak iddia edemez.
İdrarda protein tayini için kantitatif yöntemler türbidimetrik ve kolorimetrik olarak ayrılabilir.
türbidimetrik yöntemler
Türbidimetrik yöntemler şunları içerir:
- sülfosalisilik asit (SSK) ile protein tayini,
- trikloroasetik asit (TCA) ile protein tayini,
- benzetonyum klorür ile protein tayini.
Türbidimetrik yöntemler, çöktürücü ajanların etkisi altında asılı partiküllerin bir süspansiyonunun oluşumu nedeniyle idrar proteinlerinin çözünürlüğündeki azalmaya dayanır. Test numunesindeki protein içeriği, ya ışık saçan parçacıkların sayısı (nefelometrik analiz yöntemi) ile belirlenen ışık saçılımının yoğunluğu ile ya da ortaya çıkan süspansiyon nedeniyle ışık akısının zayıflaması (bulanıklıklı analiz yöntemi) ile değerlendirilir.
İdrarda protein tespiti için çöktürme yöntemlerinde saçılan ışık miktarı birçok faktöre bağlıdır: reaktiflerin karıştırılma hızı, reaksiyon karışımının sıcaklığı, ortamın pH değeri, yabancı bileşiklerin varlığı, fotometrik yöntemler. Reaksiyon koşullarının dikkatli bir şekilde gözlemlenmesi, sabit bir parçacık boyutuna sahip stabil bir süspansiyonun oluşumuna ve nispeten tekrarlanabilir sonuçlar elde edilmesine katkıda bulunur.
Bazı ilaçlar, idrarda protein belirlemeye yönelik türbidimetrik yöntemlerin sonuçlarını etkileyerek "yanlış pozitif" veya "yanlış negatif" olarak adlandırılan sonuçlara yol açar. Bunlar arasında bazı antibiyotikler (benzilpenisilin, kloksasilin vb.), radyoopak iyot içeren maddeler, sülfanilamid preparatları bulunur.
Türbidimetrik yöntemlerin standartlaştırılması zordur ve çoğu zaman hatalı sonuçlara yol açar, ancak buna rağmen, reaktiflerin düşük maliyeti ve bulunabilirliği nedeniyle şu anda laboratuvarlarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Rusya'da en yaygın olarak kullanılan yöntem, sülfosalisilik asit ile protein tayinidir.
Kolorimetrik Yöntemler
En hassas ve doğru olanı, proteinlerin spesifik renk reaksiyonlarına dayanan toplam idrar proteinini belirlemeye yönelik kolorimetrik yöntemlerdir.
Bunlar şunları içerir:
- biüret reaksiyonu,
- alçak yöntem,
- çeşitli boyaların proteinlerle kompleks oluşturma yeteneğine dayalı yöntemler:
- Ponceau S (Ponceau S),
- Coomassie Parlak Mavi (Coomassie Parlak Mavi)
- pirogallol kırmızısı (Pirogallol Kırmızısı).
Uygulamacı açısından bakıldığında, araştırma akışının yoğun olduğu laboratuvarın günlük işlerinde, işlem sayısının çokluğundan dolayı biüret yöntemi sakıncalıdır. Aynı zamanda, yöntem yüksek analitik güvenilirlik ile karakterize edilir, proteinin geniş bir konsantrasyon aralığında belirlenmesine ve albümin, globulinler ve paraproteinlerin karşılaştırılabilir hassasiyetle saptanmasına olanak tanır, bunun sonucunda biüret yöntemi bir referans olarak kabul edilir ve idrarda protein tespiti için diğer analitik yöntemlerin karşılaştırılması için önerilir. İdrarda protein tayini için biüret yöntemi tercihen nefroloji bölümlerine hizmet veren laboratuvarlarda yapılmakta ve diğer yöntemlerle yapılan tayinlerin sonuçlarının şüpheli olduğu durumlarda ve ayrıca nefroloji hastalarında günlük protein kayıp miktarının belirlenmesinde kullanılmaktadır.
Biüret yöntemine göre duyarlılığı daha yüksek olan Lowry yöntemi, protein molekülündeki tirozin ve triptofan amino asitleri için biüret reaksiyonu ile Folin reaksiyonunu birleştirir. Yüksek duyarlılığına rağmen bu yöntem idrarda protein tayininde her zaman güvenilir sonuçlar vermemektedir. Bunun nedeni, Folin reaktifinin idrarın protein olmayan bileşenleri (çoğunlukla amino asitler, ürik asit, karbonhidratlar) ile spesifik olmayan etkileşimidir. Bunların ve diğer üriner bileşenlerin diyaliz veya protein çökeltme ile ayrılması, bu yöntemin idrardaki proteinin kantitatif tayini için başarılı bir şekilde kullanılmasına izin verir. Bazı ilaçlar - salisilatlar, klorpromazin, tetrasiklinler bu yöntemi etkileyebilir ve çalışmanın sonuçlarını bozabilir.
Yeterli hassasiyet, iyi tekrar üretilebilirlik ve boya bağlama yoluyla protein tayininin kolaylığı bu yöntemleri umut verici kılar, ancak reaktiflerin yüksek maliyeti laboratuvarlarda daha geniş kullanımlarını engeller. Şu anda, pirogallol kırmızısı ile yöntem Rusya'da daha yaygın hale geliyor.
Proteinüri düzeyi incelenirken, proteinüriyi belirlemeye yönelik farklı yöntemlerin çok sayıda idrar proteini için farklı duyarlılık ve özgüllüğe sahip olduğu akılda tutulmalıdır.
proteinüri = 0.4799 B + 0.5230 L;
proteinüri = 1,5484 B - 0,4825 S;
proteinüri = 0.2167 S + 0.7579 L;
proteinüri = 1,0748 P - 0,0986 B;
proteinüri = 1,0104 P - 0,0289 S;
proteinüri = 0.8959 P + 0.0845 L;
Nerede:
B– Coomassie G-250 ile ölçüm sonucu;
L- Lowry reaktifi ile ölçüm sonucu;
P- pirogallol molibdat ile ölçüm sonucu;
S- sülfosalisilik asit ile ölçümün sonucu.
Günün farklı zamanlarında proteinüri seviyesindeki belirgin dalgalanmaların yanı sıra idrardaki protein konsantrasyonunun diüreze bağımlılığı, idrarın bireysel bölümlerindeki farklı içeriği dikkate alındığında, böbrek patolojisindeki proteinürinin ciddiyetini idrarda günlük protein kaybıyla değerlendirmek, yani günlük proteinüriyi belirlemek artık gelenekseldir. g/gün olarak ifade edilir.
Günlük idrarın toplanması mümkün değilse, tek porsiyon idrarda protein ve kreatinin konsantrasyonunun belirlenmesi önerilir. Gün içinde kreatinin salınım hızı oldukça sabit olduğundan ve idrara çıkma hızındaki değişikliklere bağlı olmadığından, protein konsantrasyonunun kreatinin konsantrasyonuna oranı sabittir. Bu oran, günlük protein atılımı ile iyi ilişkilidir ve bu nedenle proteinürinin ciddiyetini değerlendirmek için kullanılabilir. Normalde protein/kreatinin oranı 0,2'den az olmalıdır. Protein ve kreatinin g/l cinsinden ölçülür. Proteinürinin ciddiyetini protein-kreatinin oranı ile değerlendirme yönteminin önemli bir avantajı, günlük idrarın imkansızlığı veya eksik toplanmasıyla ilişkili hataların tamamen ortadan kaldırılmasıdır.
Edebiyat:
- O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, "Proteinürinin saptanması ve değerlendirilmesinin klinik yönleri", CDL başkanının El Kitabı, No. 1, Ocak 2007
- AV Kozlov, "Proteinüri: tespiti için yöntemler", ders, St. Petersburg, SPbMAPO, 2000
- VL Emanuel, “Böbrek hastalıklarının laboratuvar tanısı. Üriner Sendrom”, - CDL başkanının el kitabı, No. 12, Aralık 2006.
- İÇİNDE VE. Pupkova, L.M. Prasolova - İdrarda ve beyin omurilik sıvısında protein tayini. Koltsovo, 2007
- Klinik Laboratuvar Araştırma Yöntemleri El Kitabı. Ed. E. A. Kost. Moskova, "Tıp", 1975
26.02.2009
Kurilyak O.A., Ph.D.
Normal olarak, protein idrarda nispeten küçük bir miktarda, genellikle günde 100-150 mg'dan fazla olmayan bir şekilde atılır.
Sağlıklı bir insanda günlük diürez 1000-1500 ml/gündür; bu nedenle fizyolojik koşullar altında protein konsantrasyonu 8-10 mg/dL'dir (0,08-0,1 g/L).
Toplam idrar proteini, üç ana fraksiyonla temsil edilir - albüminler, mukoproteinler ve globulinler.
İdrar albümini, serum albüminin glomerüllerde süzülen ve böbrek tübüllerinde yeniden emilmeyen kısmıdır; normal idrar albümin atılımı 30 mg/gün'den azdır. İdrardaki diğer bir ana protein kaynağı renal tübüllerdir, özellikle tübüllerin distal kısmıdır. Bu tübüller toplam üriner proteinin üçte ikisini salgılar; Bu miktarın yaklaşık %50'si, distal tübüllerin epitelinden salgılanan ve üriner taş oluşumunda önemli rol oynayan Tamm-Horsfall glikoproteini tarafından temsil edilmektedir. Diğer proteinler idrarda küçük miktarlarda bulunur ve böbrek tübüllerinde geri emilmeyen düşük moleküler ağırlıklı plazma proteinlerinin, böbrek tübüler epitelinden (RTE) mikroglobülinlerin ve prostat ve vajinal akıntının böbrek filtresinden süzülür.
Proteinüri, yani idrardaki protein içeriğinin artması, böbrek hasarını yansıtan en önemli semptomlardan biridir. Bununla birlikte, bir dizi başka duruma da proteinüri eşlik edebilir. Bu nedenle, iki ana proteinüri grubu vardır: renal (gerçek) ve ekstrarenal (yanlış) proteinüri.
Renal proteinüride, protein, glomerüler filtrenin geçirgenliğindeki artış nedeniyle doğrudan kandan idrara girer. Renal proteinüri genellikle glomerülonefrit, nefroz, piyelonefrit, nefroskleroz, böbreklerin amiloidozu, gebelikte nefropati, ateş, hipertansiyon vb. gibi çeşitli nefropati formlarında bulunur. Proteinüri, ağır fiziksel efor, hipotermi, psikolojik stres sonrasında sağlıklı insanlarda da bulunabilir. Yenidoğanlarda yaşamın ilk haftalarında fizyolojik proteinüri görülür ve çocuklarda ve ergenlerde asteni ile birlikte 7-18 yaşlarında hızlı büyüme ile birlikte ortostatik proteinüri (vücudun dik pozisyonunda) mümkündür.
Yanlış (ekstrarenal) proteinüride, idrardaki protein kaynağı lökositler, eritrositler ve idrar yolu epitelindeki ürotelyal hücrelerin bir karışımıdır. Özellikle idrarın alkali reaksiyonunda belirgin olan bu elementlerin parçalanması, böbrek filtresini çoktan geçmiş olan proteinin idrara girmesine yol açar. Özellikle yüksek derecede yalancı proteinüri, idrarda kan karışımı sağlar, bol hematüri ile 30 g / l veya daha fazlasına ulaşabilir. Ekstrarenal proteinürinin eşlik edebileceği hastalıklar - ürolitiazis, böbrek tüberkülozu, böbrek veya idrar yolu tümörleri, sistit, piyelit, prostatit, üretrit, vulvovajinit.
Klinik sınıflandırma, hafif (0,5 g/gün'den az), orta (0,5 ila 4 g/gün) veya şiddetli (4 g/gün'den fazla) proteinüriyi içerir.
Akut glomerülonefrit veya piyelonefrit gibi böbrek hastalığı olan hastaların çoğunda hafif proteinüri vardır, ancak nefrotik sendromlu hastalar tipik olarak idrarda günde 4 g'dan fazla protein salgılar.
Proteinin kantitatif tayini için çok çeşitli yöntemler, özellikle birleştirilmiş Brandberg-Roberts-Stolnikov yöntemi, biüret yöntemi, sülfosalisilik asit kullanan yöntem, Coomassie mavi boya, pirogallol kırmızı boya vb. kullanılan yöntemler kullanılır.
İdrarda protein tayini için çeşitli yöntemlerin kullanılması, idrarda proteinin normal içeriğinin sınırlarının yorumlanmasında ciddi karışıklığa yol açmıştır. Laboratuvarlarda en sık 2 yöntem kullanıldığından - sülfosalisilik asit ve pirogallol kırmızı boya ile, onlar için normların sınırlarının doğruluğu sorununu ele alacağız. Normal idrardaki sülfosalisilik yöntemin konumundan, protein içeriği, pirogallol yönteminin konumundan - 0,1 g / l'yi, 0,03 g / l'yi geçmemelidir! Farklar üçlü!
Sülfosalisilik asit kullanıldığında idrardaki protein konsantrasyonu normunun düşük değerleri aşağıdaki noktalardan kaynaklanmaktadır:
- kalibrasyon eğrisi, sulu bir albümin çözeltisi üzerine kuruludur. İdrar, sudan çok farklı bir bileşime sahiptir: pH, tuzlar, düşük molekül ağırlıklı bileşikler (kreatinin, üre vb.). Sonuç olarak Altshuler, Rakov ve Tkachev'e göre idrarda protein tayinindeki hata 3 kat veya daha fazla olabiliyor! Onlar. doğru tespit sonuçları ancak idrarın özgül ağırlığı çok düşük olduğunda ve bileşim ve pH açısından suya yakın olduğunda elde edilebilir;
- sülfosalisilik yöntemin diğer proteinlere kıyasla albümine karşı daha yüksek duyarlılığı (yukarıda bahsedildiği gibi, normal idrar numunelerindeki albümin toplam idrar proteininin %30'unu geçmez);
- idrarın pH'ı alkali tarafa kaydırılırsa, sülfosalisilik asit nötralize edilir, bu da protein tayini sonuçlarının hafife alınmasının nedenidir;
- çökeltilerin sedimantasyon hızı önemli ölçüde değişebilir - düşük protein konsantrasyonlarında çökelme yavaşlar ve reaksiyonun erken durdurulması sonucun olduğundan az tahmin edilmesine yol açar;
- çökeltme reaksiyonunun hızı esas olarak reaksiyon karışımının karıştırılmasına bağlıdır. Yüksek protein konsantrasyonlarında, tüpün kuvvetlice sallanması, büyük pulların oluşmasına ve bunların hızla çökmesine yol açabilir.
Metodun yukarıdaki özelliklerinin tümü, idrarda belirlenen protein konsantrasyonunun önemli ölçüde eksik tahmin edilmesine yol açar. Eksik tahminin derecesi büyük ölçüde belirli bir idrar örneğinin bileşimine bağlıdır. Sülfosalisilik asit yöntemi, olduğundan daha düşük tahmin edilen protein konsantrasyonları verdiğinden, bu yöntem için normal sınır olan 0,03 g / l, klinik laboratuvar teşhisleri hakkında yabancı referans kitaplarında verilen verilere kıyasla yaklaşık üç kat daha düşük tahmin edilmektedir.
Batı ülkelerindeki laboratuvarların büyük çoğunluğu idrardaki protein konsantrasyonunun belirlenmesi için sülfosalisilik yöntemin kullanımını terk etmiş ve bu amaçla aktif olarak pirogallol yöntemini kullanmaktadır. İdrar ve diğer biyolojik sıvılardaki protein konsantrasyonunu belirlemeye yönelik pirogallol yöntemi, protein moleküllerinin pirogallol kırmızı boya kompleksi ve sodyum molibdat kompleksi molekülleri ile etkileşimi ile oluşan renkli bir kompleksin optik yoğunluğunu ölçmenin fotometrik prensibine dayanır ( Pirogallol Kırmızı-Molibdat kompleksi).
Pirogallol yöntemi neden daha doğru idrar protein ölçümleri sağlar? İlk olarak, idrar örneğinin reaksiyon karışımında daha fazla seyreltilmesi nedeniyle. Sülfosalisilik yöntemde idrar numunesi / reaktif oranı 1/3 ise, pirogallol yönteminde bu, yöntem varyantına bağlı olarak 1/12,5 ila 1/60 arasında değişebilir ve bu da idrar bileşiminin ölçüm sonucu üzerindeki etkisini önemli ölçüde azaltır. İkincisi, reaksiyon bir süksinat tamponunda, yani sabit bir pH'ta ilerler. Ve son olarak, yöntemin ilkesinin daha "şeffaf" olduğu söylenebilir. Sodyum molibdat ve pirogallol kırmızı boya, bir protein molekülü ile kompleks oluşturur. Bu, 600 nm dalga boyunda ışığı absorbe etmeyen serbest durumdaki boya moleküllerinin, protein ile kombinasyon halinde ışığı absorbe etmesine yol açar. Bu nedenle, her bir protein molekülünü bir boya ile etiketliyoruz ve sonuç olarak, 600 nm dalga boyunda reaksiyon karışımının optik yoğunluğundaki değişimin idrardaki protein konsantrasyonu ile açıkça ilişkili olduğunu bulduk. Ayrıca, pirogallol kırmızısının farklı protein fraksiyonları için afinitesi hemen hemen aynı olduğundan, yöntem toplam idrar proteinini belirlemenizi sağlar. Bu nedenle, idrardaki protein konsantrasyonunun normal değerlerinin sınırı 0,1 g/l'dir (N. Titz tarafından düzenlenen Clinical Manual for Laboratory Tests dahil olmak üzere klinik ve laboratuvar teşhisleri için tüm modern Batı kılavuzlarında belirtilmiştir). İdrarda protein tayini için pirogallol ve sülfosalisilik yöntemlerin karşılaştırmalı özellikleri Tablo 1'de sunulmaktadır.
Sonuç olarak, laboratuvar idrarda protein tayini için sülfosalisilik yöntemden pirogallol yöntemine geçtiğinde, normal değerlerin sınırının önemli ölçüde arttığına (0,03 g / l'den 0,1 g'a) bir kez daha odaklanmak istiyorum. /l!). Laboratuvar personeli mutlaka klinisyenleri bu konuda bilgilendirmelidir, çünkü. bu durumda proteinüri tanısı ancak idrardaki protein içeriği 0,1 g/l'yi geçtiğinde konulabilir.
Kaynakça.
- Altshuler B.Yu., Rakov S.S., Tkachev G.A. // Soru. Bal. kimya. - 2001. - No.4. - C.426-438.
- Kim Yu.V., Potekhin O.E., Tokar M.I., Shibanov A.N. // laboratuvar Bal. - 2003. - No.6. - C.94-98.
- Laboratuvar Testleri için Klinik Kılavuz, ed. N. Tissa.- M.- Unimed-press.-2003.- 942 s.
- Kozlov A.V., Slepysheva V.V. İdrarda protein belirleme yöntemleri: fırsatlar ve beklentiler // Yıllık VII eserlerinin toplanması. SPb nefrolü. seminer. - St.Petersburg: TNA. - 1999. - C.17-28.
- Pupkova V.I., Pikalov I.V., Khrykina E.N., Kharkovskiy A.V. // Haber "En İyi Vektör". - 2003. - 4 numara (30).
- Chambers R.E., Bullock D.G., Hangisi J.T. // Ann. klinik biyokimya - 1991. - Cilt. 28 (Bölüm 5). - S.467-473.
- Klinik Laboratuvarlar Tıbbı. Ed. Kenneth D. McClathey tarafından. - 2. baskı-2001.- 1993s.
- Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // klinik. biyokimya - 2000. - Cilt. 33.-S.487-494.
- Franke G., Salvati M., Sommer R.G. Üriner protein tahlili için bileşim ve cihaz ve aynı // ABD Patent No. 5326707'yi kullanma yöntemi. - 1994.
- Kaplan IV, Levinson S.S. // klinik. kimya - 1999. - Cilt. 45.-S.417-419.
- Kashif W., Siddiqi N., Dincer H.E., Dincer A.P., Hirsch S. // Cleveland Clin. J. of Med. - 2003. - Cilt. 70(6). - S.535-547.
- Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Düşük P, Potter JM. // klinik. kimya - 2001. - Cilt. 47.-S.2183-2184.
- Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Fransızca makale. - Ann. Biol. klinik (Paris). - 1998. - Cilt. 56(6). - S.719-723.
- Marshall T., Williams KM // klinik. kimya - 2003. - Cilt. 49(12). - S.2111-2112.
- Pugia M., Newman D.J., Lott JA, D'Mello L., Clark L., Profitt JA, Cast T. // Clin. Chim. acta. - 2002. - Cilt. 326(1-2). - S.177-183.
- Ringsrud K.M., Linne J.J. İdrar tahlili ve vücut sıvıları: A ColorText ve Atlas // Mosby. - 1995. - S.52-54.
- Shepard MD, Penberthy L.A. // klinik. kimya - 1987. - Cilt. 33.-S.792-795.
- Williams K.M., Marshall T. // J. Biochem. biyografiler. yöntemler. - 2001. - Cilt. 47.-S.197-207.
- Williams K.M., Arthur S.J., Burrell G., Kelly F., Phillips D.W., Marshall T. // J. Biochem. biyografiler. yöntemler. - 2003. - Cilt. 57(1). - S.45-55.
Yöntem ilkesi
Sülfosalisilik asit ile protein pıhtılaşması sırasında bulanıklığın yoğunluğu, konsantrasyonu ile orantılıdır.
Gerekli reaktifler
BEN.%3 sülfosalisilik asit çözeltisi.
II.%0,9 sodyum klorür çözeltisi.
III. Albümin standart solüsyonu- %1 çözelti (10 mg albümin içeren 1 ml çözelti): 1 g liyofilize albümin (insan veya sığır serumundan), 100 ml'lik bir şişede az miktarda %0,9 sodyum klorür çözeltisi içinde eritilir ve daha sonra aynı çözelti ile işarete ayarlanır. Reaktif, 1 ml %5 sodyum azid solüsyonu (NaN3) eklenerek stabilize edilir. Reaktif buzdolabında saklandığında 2 ay iyidir.
Özel ekipman- fotoelektrik kolorimetre.
Araştırma ilerlemesi
Test tüpüne 1,25 ml filtrelenmiş idrar eklenir, %3'lük sülfosalisilik asit çözeltisi ile 5 ml'ye tamamlanır, karıştırılır. 5 dakika sonra, optik yol uzunluğu 5 mm olan bir küvette kontrole karşı 590-650 nm dalga boyunda (turuncu veya kırmızı ışık filtresi) bir fotoelektrokolorimetre üzerinde ölçülür. Test tüpü, 5 ml'ye 1,25 ml filtrelenmiş idrara %0,9 sodyum klorür çözeltisinin eklendiği bir kontrol görevi görür. Hesaplama, tabloda belirtildiği gibi standart çözeltiden hazırlanan dilüsyonların yapımı için kalibrasyon grafiğine göre yapılır.
Kalibrasyon grafiği oluşturmak için dilüsyonların hazırlanması
tüp numarası | standart solüsyon ml | %0,9 sodyum klorür solüsyonu ml | Protein konsantrasyonu g/l |
| 1 | 0,05 | 9,95 | 0,05 |
| 2 | 0,1 | 9,9 | 0,1 |
| 3 | 0,2 | 9,8 | 0,2 |
| 4 | 0,5 | 9,5 | 0,5 |
| 5 | 1,0 | 9,0 | 1,0 |
Elde edilen her çözeltiden 1.25 ml alınır ve deney numunesi olarak işlenir.
Kalibrasyon grafiğinin yapımında düz çizgi bağımlılığı 1 g/l'ye kadar korunur. Daha yüksek konsantrasyonlarda numune seyreltilmeli ve hesaplamada seyreltme dikkate alınmalıdır.
İdrarda organik iyot içeren kontrast madde varlığında yalancı pozitif sonuçlar alınabilir. Bu nedenle, iyot preparatları alan kişilerde test kullanılamaz, yanlış pozitif sonuç, sülfa ilaçları, yüksek dozlarda penisilin ve idrarda yüksek konsantrasyonlarda ürik asit kullanımına bağlı olabilir.
Yükleniyor...
